Los Microarrays de ADN son colecciones de moleculas de ADN inmvilizadas sobre un soporte en localizaciones conocidas que van a ser empledas en el estudio de la secuencia de genes conocidos o para mirar los niveles de la expresion genetica.
Al momento de la fabricasion de un Microarray debemos tener en cuenta:
1) Que tipo de sonda vamos a utilizar
2) Que tipo de soporte vamos a emplear
3) La forma como se va a inmovilizar las sonda
4)
El metodo empleado para la deteccion de hibridacion
5) Amplificasion de la sonda
6) Sistema de analisis e interpretacion la señal.
Sonda
las sondas son fragmentos de ADN, RNA, o PNAInmovilizacion de la sonda
la inmovilizacion de las sondas es un paso clave ya que debe estar relacionada con que soporte vamos a implementar y que tecnica utilizaremos para fabricar el array, por esto debemos tener en cuenta:
1) Que tecnica implementaremos en la inmovilizacion de la sonda y esta debe ser muy estable durante todas las veces y las etapas de la tecnica.
2) Las sondas deben ser inmovilizadas en la posicion adecuada de tal forma que al darce el emparejamiento de las bases no se presenten altercados por no estar bien ubicada la sonda.
3) Las sondas deben ser y permanecer funcionales despues de ser inmovilizadas
Soporte
El tipo de soporte puede tener diferente naturaleza:
1)soportes rigidos como el plastico
2)membranas de nylon
3)soportes rigidos como el vidrio siendo estas las mas utilizadas en los microarrays de ADN, ya que en el se pueden realizar marcaje fluorescente,tienen alta sensibilidad y permiten realizar distintas procedimientos quimicos por su resistencia y facil manipulacion.
TECNOLOGIAS DE FABRICACIÓN DE MICROARRYS DE ADN
La fabricación de un microarryas consiste en la dispocisión de las ondas sobre la superficie del mismo
en pocisiones conocidsa y ordenadas. Existen diferentes tencnologias para la produccion de microarrys que han de cumplir una seride requisitos, lo que ha generado una serie de aparicion de plataformas comerciales.
Estos requerimientos han motivado que los avances tencnologicos relacionados con la fabricacion de microarrays queden reflajados en los sistemas de produccion y las plataformas intriducidas por las diferentes empresas.
Requisitos de las tecnologias de produccionde microarrays
Consistencia Uniformidad
Automatizacion Alta resolucion
Velocidad de fabricacion Alta precision
Coste-efectividad Reproducibilidad
Versatilidad Robustez
Principales tecnologias empleadas en la fabricacion de microarrays
Ink jetting: Impresion de sondas sin contacto
Pin deposition: impresion de sondas por contacto
Fotolitografia: Sistesis in situ mediante metodos quimicos
Polipirrolizacion: inmovilizacion electroquimicas de sondas modificadas por pirroles
Electrodepocision: Inmovilizacion de sondas de ADN sobre nano particulas de biorreconocimiento en electrodos
Union con direccionamiento electronico
Tecnicas de la deteccion de hibridacionen microarrays de ADN
La deteccion de hibridacion es un paso clave para revelar que sondas se han unido a sus dianas complementarias procedentes de la muestra, Determinadas tecnicas de deteccion de hibridacion de ADN requieren el marcaje previo de la sonda ala molecula diana por lo que la deteccion de la hibridacion es un proceso que limta el desarrollo de nuevas plataformas de biochips. Los metodos de deteccion en los cuales no se necesita el marcaje de la diana estan tomando relevancia en nuevas aplicaiones de los biochips, ya que permiten una mayor sensibilidad , reduccionde la muestra necesaria y simplificacion del proceso de preparacion de la muestra.
Katehrin Betancour
Adriana Poveda
Paola Hernandez
Deymer Paternima
David Salas
Sandra Arroyo
Jennifer Viloria
Biblografia:
Angenet, P et. al (2003) Next Generation of protein Microarrayn support materials: A. Vol 1009:97 104
Irizarry et. al. (2005)Multiple Laboratory Comparisyon of Microarray plataforms. Natire methods 345-50
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